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液相色譜柱的使用要注意哪些方面
  • 更新日期:2019-08-02     信息來源:本站      瀏覽次數(shù):1826
    • 液相色譜柱在使用前,要先進行柱的性能測試,并將結(jié)果保存起來,作為今后評價柱性能變化的參考。在做柱性能測試時要按照色譜柱出廠報告中的條件進行(出廠測試所使用的條件是佳條件),只有這樣,測得的結(jié)果才有可比性。注意:柱性能可能由于所使用的樣品、流動相、柱溫等條件的差異而有所不同。  

      1、樣品的前處理  
      建議使用流動相溶解樣品;  
      使用預處理柱除去樣品中的強極性或與柱填料產(chǎn)生不可逆吸附的雜質(zhì);  
      使用0.45μm的過濾膜過濾除去微粒雜質(zhì)。  

      2、流動相的配制  
      液相色譜是樣品組分在柱填料與流動相之間質(zhì)量交換而達到分離的目的,因此要求流動相具備以下的特點:  
      流動相對樣品具有一定的溶解能力,保證樣品組分不會沉淀在柱中(或長時間保留在柱中);  
      流動相與樣品不產(chǎn)生化學反應;  
      流動相的黏度要盡量小,以便得到好的分離效果;降低柱壓降,延長泵的使用壽命(可運用提高溫度的方法降低流動相的黏度);  
      流動相的物化性質(zhì)要與使用的檢測器相適應。如使用UV檢測器,建議使用對紫外吸收較低的溶劑配制;  
      流動相沸點不要太低,否則容易產(chǎn)生氣泡,導致實驗無法進行。  
      在流動相配制好后,一定要進行脫氣。除去溶解在流動相中的微量氣體既有利于檢測,還可以防止流動相中的微量氧與樣品發(fā)生作用。  

      3、流動相流速的選擇  
      因柱效是柱中流動相線性流速的函數(shù),使用不同的流速可得到不同的柱效。對于一根特定的色譜柱,要追求佳柱效,建議使用佳流速。對內(nèi)徑為4.6mm的色譜柱,流速一般選擇1ml/min,對于內(nèi)徑為4.0mm柱,流速0.8ml/min為佳。  
      當選用佳流速時,分析時間可能延長??刹捎酶淖兞鲃酉嗟南礈鞆姸鹊姆椒ㄒ钥s短分析時間(如使用反相柱時,可適當增加甲醇或乙腈的含量)。  
      注意:  
      含水流動相盡量在實驗前配制,尤其是夏天使用緩沖溶液作為流動相不要過夜。建議加入*,防止細菌生長。  
      流動相要求使用0.45μm濾膜過濾,除去微粒雜質(zhì)。  
      使用HPLC級溶劑配制流動相,使用合適的流動相可延長色譜柱的使用壽命,提高柱性能。
       

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